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美國(guó)cellscript試劑盒包括用于體外轉(zhuǎn)錄的試劑盒以及使用帽類似物或加帽酶的5' RNA加帽的試劑盒。
l mRNA為什么要加帽：
1、防止5'末端被降解。
2、在細(xì)胞中，幫助成熟mRNA穿過(guò)核膜，進(jìn)入胞質(zhì)。
3、增強(qiáng)翻譯。
4、幫助后續(xù)可變剪接的過(guò)程。
l 加帽類型：
1、Cap 0型（m7G5ppp5Np）：僅所加的鳥(niǎo)嘌呤核苷酸被甲基化，存在于單細(xì)胞。
2、Cap I型（m7G5ppp5NmpNp）：轉(zhuǎn)錄本第一個(gè)核苷酸的2'-O位也被甲基化，普遍存在于所有細(xì)胞。
3、Cap II型（m7G5ppp5NmpNmpNp）：轉(zhuǎn)錄本第一和第二位的2'-O位都甲基化，存在于10％-15％細(xì)胞中。
l 體外加帽的必要條件：
1、在基因組全長(zhǎng)克隆時(shí)，必須在正向引物5'末端添加T7強(qiáng)啟動(dòng)子序列。
2、以T7啟動(dòng)子作為體外轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子。
3、在正向引物5'末端加一個(gè)“蓋帽G"，有利于提高體外轉(zhuǎn)錄得到的RNA分子的侵染活性。
產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 規(guī)格 | 簡(jiǎn)介 |
T7 mScript™ Standard mRNA Production System | C-MSC11610 | 10次 | 用于體外mRNA的轉(zhuǎn)錄過(guò)程， 將高產(chǎn)量轉(zhuǎn)錄與轉(zhuǎn)錄后加帽和加尾的優(yōu)點(diǎn)集于一身。 |
C-MSC100625 | 25次 | ||
T7-FlashScribe™ Transcription Kit | C-ASF3507 | 50次 | 用于使用T7 RNA聚合酶和經(jīng)典(GAUC) NTP生產(chǎn)體外轉(zhuǎn)錄的RNA。 |
T7-Scribe™ Standard RNA IVT Kit | C-AS3107 | 50次 | |
SP6-Scribe™ Standard RNA IVT Kit | C-AS3106 | 50次 | 用于使用 SP6 RNA 聚合酶和經(jīng)典 (GAUC) NTP 生產(chǎn)體外轉(zhuǎn)錄的 RNA。 |
ScriptCap™ m7G Capping System | C-SCCE0625 | 25次 | 用于使用 ScriptCap Capping Enzyme、GTP 和SAM對(duì)體外轉(zhuǎn)錄的RNA進(jìn)行轉(zhuǎn)錄后加帽?？蛇M(jìn)行cap0和cap1加帽。 |
ScriptCap™ 2'-O-Methyltransferase Kit | C-SCMT0625 | 25次 | 用于將含有Cap 0帽的RNA轉(zhuǎn)化為 含有Cap I帽的 RNA。 |
ScriptCap™ Cap 1 Capping System | C-SCCS1710 | 10次 | 用于使用ScriptCap 加帽酶、ScriptCap 2'-O-甲基轉(zhuǎn)移酶、GTP和SAM對(duì)體外轉(zhuǎn)錄的RNA進(jìn)行轉(zhuǎn)錄后加帽。Cap 0和Cap I可分別加帽。 |
l 美國(guó)cellscript試劑盒(C-SCCS1710)原理：
ScriptCap™ Cap 1 Capping System可提供ScriptCap Capping Enzyme和ScriptCap 2'-O-Methyltransferase兩種酶進(jìn)行蓋帽過(guò)程。其中，ScriptCap Capping Enzyme可在體外通過(guò)三種酶促反應(yīng)催化一個(gè)cap nucleotide（帽核苷酸）連接到具有5'-三磷酸基團(tuán)的初始RNA的5'末端 ，從而形成Cap 0，其表現(xiàn)形式是：m7G(5')ppp(5')N1(pN)x-OH(3') 。(m7G代表N7-甲基鳥(niǎo)苷帽核苷，ppp三磷酸鏈接帽苷碳端和RNA氮端，N1(pN)x-OH(3') 代表初始轉(zhuǎn)錄后RNA）。
ScriptCap 2'-O-Methyltransferase可介導(dǎo)Cap 0到Cap I的蓋帽過(guò)程，其可從供體SAM（S-腺苷甲硫氨酸）中轉(zhuǎn)移一個(gè)甲基到Cap 0的2'位置，從而形成Cap I。
l 美國(guó)cellscript試劑盒(C-SCCS1710)特點(diǎn)：
1. ScriptCap™ Cap 1 Capping System提供ScriptCap Capping Enzyme和ScriptCap 2'-O-Methyltransferase（2'氧甲基轉(zhuǎn)移酶），可在RNA的5'末端產(chǎn)生Cap 0或Cap I帽結(jié)構(gòu)，也可單獨(dú)獲得Cap 0或Cap I。
2. 反應(yīng)后的Cap RNA可直接進(jìn)行Poly(A)聚合反應(yīng)，無(wú)需再次進(jìn)行處理，可方便進(jìn)行后續(xù)的翻譯過(guò)程。
3. ScriptCap Cap I Capping System改進(jìn)了共轉(zhuǎn)錄加帽方法，使其加帽效率可以接近100%，所有加帽RNA均能夠大量且正確產(chǎn)生，最終可以以合理的成本獲得大量且正確的加帽RNA 。
l 美國(guó)cellscript試劑盒(C-SCCS1710)應(yīng)用：
該產(chǎn)品多用于用于動(dòng)物體外RNA轉(zhuǎn)錄合成過(guò)程，以進(jìn)行5'末端的Cap 0或Cap 1結(jié)構(gòu)的產(chǎn)生，提高體外RNA的穩(wěn)定性和翻譯效率。
